測(cè)定細(xì)胞免疫功能首先要從人或動(dòng)物外周血或組織中獲取有活性的細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞等。血液主要由血清和血細(xì)胞組成，主要包括紅細(xì)胞，白細(xì)胞和血小板等。白細(xì)胞還可以細(xì)分為淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等。由于這些細(xì)胞具有簡(jiǎn)單的細(xì)胞核，統(tǒng)稱為外周血單核細(xì)胞 (PBMC)。 取得有活性的細(xì)胞應(yīng)根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)、檢驗(yàn)和治療的目的，采用不同方法，需要考慮的因素有：1細(xì)胞純度，2細(xì)胞獲得量，3細(xì)胞活力，4使用方法的簡(jiǎn)易程度和本室條件等。PBMC 單核細(xì)胞可通過(guò) Ficoll 密度梯度離心的方法，從血液中進(jìn)行分離。

       在 Ficoll 密度梯度離心的過(guò)程中，需要注意的有：
● 使 Ficoll-Paque Plus 和 PBS 升至室溫，并用 70% 乙醇消毒血袋外部，良好的溫度 (18-20℃) 控制有利于穩(wěn)定 Ficoll 的密度，可以實(shí)現(xiàn)更好的分離效果
● 血液與 PBS 的比例保持 1：1，擰緊蓋后顛倒混合幾次
● 可以使用 ep 25 mL 錐底管，并輕輕的將血液/PBS 混合物鋪置 Ficoll 上
● 離心參數(shù)：400 x g, 20 ℃，加減檔 0/0，防止離心結(jié)束后的剎車震動(dòng)，防止產(chǎn)生重懸，更利于良好分層。隨后開(kāi)啟“Atset”功能，可以在達(dá)到轉(zhuǎn)速后開(kāi)始計(jì)時(shí)，離心 30 分鐘
● 使用 PBS 洗滌細(xì)胞，離心除去殘余的 Ficoll 液，400 x g, 20 ℃，10 分鐘，重復(fù)幾次
       綜上所述，一臺(tái)搭配了適當(dāng)?shù)乃睫D(zhuǎn)子的 5804R 多用途離心機(jī)會(huì)是您入門級(jí)的選擇，同時(shí)又不失其專業(yè)性。
 

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